在日常細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,我們經(jīng)常需要計(jì)算細(xì)胞濃度,以進(jìn)一步確定接種濃度或細(xì)胞數(shù)量。盡管自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀提供了快速性,但對于某些細(xì)胞,尤其是那些處于復(fù)雜狀態(tài)的細(xì)胞,有研究表明其分析性能并不一致[1](對于細(xì)胞形態(tài)的識別,所采用的是不一樣的方法)。
在臨床實(shí)踐中,因血細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)儀通常無法精準(zhǔn)地識別細(xì)胞形態(tài),所以需使用經(jīng)典的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行儀器校準(zhǔn)。利用顯微鏡手動(dòng)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),這種方法已經(jīng)被廣泛認(rèn)可[2]。
血細(xì)胞計(jì)數(shù)板規(guī)格及計(jì)數(shù)原理
血細(xì)胞計(jì)數(shù)板是一種經(jīng)典的細(xì)胞計(jì)數(shù)工具,具有上下兩個(gè)計(jì)數(shù)池。
在其上方覆蓋蓋玻片,形成深度為0.10mm的計(jì)數(shù)池。每個(gè)計(jì)數(shù)池分為9個(gè)大格,每個(gè)大格的規(guī)格為1.00mm×1.00mm。因視野所限,不易操作,容易造成較大誤差,所以一般采用定點(diǎn)(計(jì)數(shù)室4個(gè)角的大方格)取樣計(jì)數(shù)。(直徑較小的細(xì)胞如紅細(xì)胞,采用中間一個(gè)大方格內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)5個(gè)區(qū)域采集計(jì)數(shù))
細(xì)胞濃度=(四個(gè)大方格的細(xì)胞數(shù)之和)/4×稀釋倍數(shù)×104個(gè)Cell/mL
博大博聚細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的計(jì)數(shù)之道
博大博聚細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,沿用經(jīng)典血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)原理進(jìn)行研制(JJG 552-1988 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板試行檢定規(guī)程),并可搭載一次性細(xì)胞計(jì)數(shù)片,其細(xì)胞計(jì)數(shù)片與標(biāo)準(zhǔn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)池高度相同。
①在使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí),儀器相當(dāng)于一個(gè)自帶電腦的自動(dòng)化顯微成像系統(tǒng),屏幕能夠提供細(xì)胞高清圖像的實(shí)時(shí)預(yù)覽,精密的三軸聯(lián)動(dòng)控制系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)目標(biāo)視野的精準(zhǔn)走位,實(shí)時(shí)自動(dòng)調(diào)焦,保證圖片的清晰度,并通過算法自動(dòng)進(jìn)行識別與計(jì)數(shù)。
②在使用一次性細(xì)胞計(jì)數(shù)片時(shí),儀器屏幕會(huì)顯示虛擬刻線,刻線對應(yīng)的實(shí)際大小經(jīng)“仿細(xì)胞校準(zhǔn)板(發(fā)明zhuanli號:ZL 2020 21855359.4)"嚴(yán)格標(biāo)定,與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上的刻線面積(1*1mm2)一致。
③一次性細(xì)胞計(jì)數(shù)片的空腔高度設(shè)計(jì)嚴(yán)格標(biāo)定為0.1mm,計(jì)數(shù)體積(0.1mm3)與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板一致。
④在兩種耗材上,博大博聚細(xì)胞計(jì)數(shù)儀都采用標(biāo)準(zhǔn)的濃度計(jì)算公式,細(xì)胞濃度=(四個(gè)大方格的細(xì)胞數(shù)之和)/4×稀釋倍數(shù)×104個(gè)Cell/mL。
這使得博大博聚計(jì)數(shù)儀能夠?qū)崿F(xiàn)計(jì)數(shù)結(jié)果人工核對。
注意:個(gè)別型號不做兼容血球計(jì)數(shù)板的設(shè)置,但是設(shè)計(jì)原理相同(具體信息請咨詢博大博聚科技有限公司)
博大博聚的細(xì)胞計(jì)數(shù)新范式
博大博聚細(xì)胞計(jì)數(shù)儀支持非染色(發(fā)明zhuanli號ZL 2013 1 0101403.0)、臺盼藍(lán)染色和熒光染色等多種計(jì)數(shù)模式。
儀器預(yù)設(shè)多種細(xì)胞樣本類型,對于更復(fù)雜的細(xì)胞樣本,可通過自定義輔助判讀,以尋找適合不具代表性樣本的識別參數(shù)并可無限新增。
無論是秉持傳統(tǒng)方法還是融合創(chuàng)新思路,博大博聚計(jì)數(shù)儀都旨在為細(xì)胞計(jì)數(shù)和分析提供更全面的解決方案。
參考文獻(xiàn)
[[1]] .Borzova E. The Absolute Basophil Count. Methods Mol Biol. 2020;2163:109-124.
[[1]] Zhang M, Gu L, Zheng P, et al. Improvement of cell counting method for Neubauer counting chamber. J Clin Lab Anal. 2020;34:e23024.
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