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博大博聚細(xì)胞計(jì)數(shù)儀帶你走進(jìn)細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)

更新時(shí)間:2022-04-25瀏覽:896次

   細(xì)胞計(jì)數(shù)是確定培養(yǎng)中鋪板的細(xì)胞濃度、確定細(xì)胞活力和評估細(xì)胞分離程序結(jié)果的一個(gè)組成部分。建議在細(xì)胞分離之前進(jìn)行初始細(xì)胞計(jì)數(shù);然后可以將該數(shù)字與細(xì)胞分離后的細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)行比較,以計(jì)算細(xì)胞恢復(fù)率。此外,當(dāng)預(yù)期細(xì)胞活力可能會(huì)降低時(shí),應(yīng)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù),例如,在處理冷凍保存的細(xì)胞或離體操作的細(xì)胞時(shí)。本文描述了如何使用3%乙酸和亞-CH3藍(lán)進(jìn)行總有核細(xì)胞計(jì)數(shù),以及如何通過臺(tái)盼藍(lán)染料排除進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)。


  實(shí)驗(yàn)步驟和方法:

  I部分:樣品制備

  選項(xiàng)1:用3%乙酸和亞-CH3藍(lán)對總有核細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)行細(xì)胞稀釋

  使用磷酸鹽緩沖鹽水或無血清培養(yǎng)基對充分混合的單細(xì)胞懸浮液進(jìn)行適當(dāng)稀釋。為了準(zhǔn)確表示濃度,請使用至少20μL的細(xì)胞懸浮液進(jìn)行稀釋。

  示例:制備10倍稀釋液

  在微量離心管或96孔板的孔中加入180μL的3%乙酸和亞-CH3藍(lán)。混合細(xì)胞懸浮液,將20μL添加到含有3%乙酸和亞-CH3藍(lán)的試管或孔中。

  選項(xiàng)2:通過臺(tái)盼藍(lán)染料排除對活細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)行細(xì)胞稀釋

  確保要計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液*重新懸浮。在細(xì)胞沉降之前,將適量的細(xì)胞懸液(20-200μL)放入離心管中。加入等體積的0.4%臺(tái)盼藍(lán)并輕輕混合。將混合物在室溫(15°C–25°C)下孵育5分鐘。

  II部分:使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)

  通過用70%C2H6O清潔腔室表面來制備血細(xì)胞計(jì)數(shù)器。擦干。將蓋玻片放在腔室上。

  使用20μL移液器重新懸浮細(xì)胞混合物,并將10μL的染色細(xì)胞放入血細(xì)胞計(jì)室。

  注意:小心不要移動(dòng)蓋玻片。允許毛細(xì)作用將樣品吸入。

  將血細(xì)胞計(jì)數(shù)器放在雙目光學(xué)顯微鏡的載物臺(tái)上。將顯微鏡調(diào)整到10倍放大倍率并聚焦在細(xì)胞上。

  使用手動(dòng)計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)器,計(jì)算血細(xì)胞計(jì)數(shù)器四個(gè)外部正方形中的每一個(gè)中的細(xì)胞(染色的細(xì)胞核)(圖1A),包括位于底部和左側(cè)周邊的細(xì)胞,但不包括位于頂部和右手邊(圖1B)。如果在第一部分中使用了3%乙酸和亞-CH3藍(lán),則計(jì)算染色的細(xì)胞核。如果在第一部分中使用了臺(tái)盼藍(lán),則計(jì)算未染色的活細(xì)胞。

  

細(xì)胞計(jì)數(shù)儀

細(xì)胞計(jì)數(shù)儀

 


  血細(xì)胞計(jì)數(shù)器圖指示(A)四組紅色和(B)其中一組應(yīng)用于計(jì)數(shù)的16個(gè)方塊。

  注意:適當(dāng)?shù)南♂屜禂?shù)將取決于起始樣本中存在的大致細(xì)胞數(shù)量,但應(yīng)使血細(xì)胞計(jì)數(shù)器中的細(xì)胞濃度為每平方(即大或主要正方形)50-100個(gè)細(xì)胞。如果血細(xì)胞計(jì)數(shù)器上每個(gè)主要正方形的細(xì)胞多于或少于大約100個(gè),請使用更大或更小的稀釋因子制備新的稀釋樣品。

  血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的九個(gè)主要方塊中的每一個(gè)都代表0.1mm3的總體積。由于1cm3相當(dāng)于1mL,因此可以使用以下等式確定細(xì)胞濃度:

  有核細(xì)胞總數(shù)/mL=每平方平均細(xì)胞數(shù)x稀釋因子x104

  示例:如果四個(gè)外部方塊中的每一個(gè)的細(xì)胞計(jì)數(shù)在100稀釋因子下分別為21、15、20和17,則平均細(xì)胞計(jì)數(shù)將為(21+15+20+17)÷4=18.25。

  因此,原始懸浮液中細(xì)胞的總濃度為:18.25x100x10^4=18,250,000個(gè)細(xì)胞/mL。

  使用人工的細(xì)胞計(jì)數(shù)方法誤差率較高,為提高細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確度和細(xì)胞計(jì)數(shù)效率可以使用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。博大博聚旗下的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀系列,具有多種規(guī)格供選擇,可以滿足不同的用戶需求。

 

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